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二氧化碳培養(yǎng)箱做細(xì)胞培養(yǎng)及凍存

實(shí)驗(yàn)材料二氧化碳培養(yǎng)箱、液氮罐、超低溫低溫冰箱、電熱恒溫水浴鍋、離心機(jī)等。培養(yǎng)皿、滴瓶、吸管、離心管、燒杯、量筒、三角瓶、培養(yǎng)瓶等下面喆圖小編給大家說下簡易的實(shí)驗(yàn)步驟將凍存細(xì)胞從液氮中取出后，在37℃電熱恒溫水浴鍋內(nèi)不斷搖動促進(jìn)其融化。移入15ml離心管中，加入10ml預(yù)熱的DMEM*培養(yǎng)基，輕輕吹勻，離心2min，棄上清液。加入10mlDMEM培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加入10mlDMEM*培養(yǎng)基，輕輕吹打，接種于10cm盤中，在含5%CO2的二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。細(xì)胞密度達(dá)到...

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用帖壁法純化巨噬細(xì)胞

1．用含20％～40％小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液將巨噬細(xì)胞配成2×106～4×106/ml的濃度。以每平方厘米2×105～4×105個(gè)巨噬細(xì)胞的密度將細(xì)胞懸液接種到玻璃培養(yǎng)皿（瓶）或塑料培養(yǎng)皿（瓶）中。37℃5％CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1小時(shí)或24小時(shí)。1小時(shí)培養(yǎng)節(jié)省時(shí)間但會丟失一些粘附力弱的巨噬細(xì)胞，而24小時(shí)可以得到較多的巨噬細(xì)胞。20％～40％的小牛血清可以減少B淋巴細(xì)胞的粘附。2．搖晃培養(yǎng)皿（瓶），懸浮未粘附細(xì)胞，吸出細(xì)胞懸液。用預(yù)溫的Hanks液...

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羊水細(xì)胞培養(yǎng)

羊水中含有胎兒脫落的上皮細(xì)胞，可在體外培養(yǎng)用以分析胎兒染色體核型。目前國內(nèi)外大都采用腹腔羊膜穿刺術(shù)，妊娠12-30周的羊水細(xì)胞均可培養(yǎng)成功。羊膜腔穿刺取羊水行染色體分析，最佳孕周為16周左右。因此時(shí)羊水增長快，羊水中細(xì)胞較多，細(xì)胞培養(yǎng)易于生長，而且不易損傷胎兒。國內(nèi)多數(shù)選擇的穿刺時(shí)間在妊娠的第16-30周。國外現(xiàn)已較多地采用妊娠早期的羊膜穿刺，但需在B超下定位及穿刺。羊水量按妊娠時(shí)間大致計(jì)算（1ml/w）。資料表明，穿刺病例的妊娠結(jié)局、分娩方式、胎兒的出生體重等與未穿刺無明顯...

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靶細(xì)胞殺傷實(shí)驗(yàn)：LDH法

一、效應(yīng)細(xì)胞的制備激惹5天后，于無菌條件下取出受鼠引流的腹股溝淋巴結(jié)，100目鋼網(wǎng)研磨，調(diào)整細(xì)胞濃度為2×107.ml-1。臺盼藍(lán)色要求存活率95%。二、靶細(xì)胞的制備P815細(xì)胞株系DBA/2小鼠的肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞株。連續(xù)傳代培養(yǎng)，調(diào)整細(xì)胞濃度為2×105/ml或3.33×105/ml（加入α-Lyt2mAb時(shí)的靶細(xì)胞濃度），臺盼藍(lán)染色成活率95%。三、LDH釋放法測定CTL的功能按表1加樣于96孔培養(yǎng)板中，設(shè)3個(gè)復(fù)孔?；靹蛑枚趸寂囵B(yǎng)箱中孵育4h。室溫離心，用微量加樣器每孔...

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研究T細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子的3種方法

1）研究細(xì)胞因子mRNA的方法絕大多數(shù)細(xì)胞因子mRNA在T細(xì)胞中只短暫存在，其存在的量與T細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子的量也有很好的相關(guān)性。所以，在大多數(shù)情況下，細(xì)胞內(nèi)mRNA的量可以反映細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子的情況。檢測細(xì)胞因子mRNA的試驗(yàn)主要有：競爭性聚合酶鏈反應(yīng)、Northern印跡雜交、斑點(diǎn)雜交、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)、原位雜交。2）研究細(xì)胞因子的免疫檢測法免疫檢測法主要有放射免疫檢測法、酶免疫測定法、免疫熒光測定法和免疫發(fā)光測定法等。3）研究細(xì)胞因子的生物學(xué)方法1．用含10％小牛血清的...

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噬神經(jīng)元的腺病毒載體的構(gòu)建

實(shí)驗(yàn)試劑人類胚胎腎（HEK）293T細(xì)胞腺病毒轉(zhuǎn)移載體質(zhì)粒腺病毒包裝載體PLP1，pLP2（之前），PLP/VSVGDMEM培養(yǎng)基青霉素，鏈霉素-谷氨酰胺（100X）磷酸鹽緩沖液PBS（-）胎牛血清凝聚胺實(shí)驗(yàn)設(shè)備10-cm的細(xì)胞培養(yǎng)皿50毫升錐形離心管Steriflip-GP過濾器（0.22微米）超離心管17.0mL5％二氧化碳培養(yǎng)箱熒光顯微鏡生物安全柜離心機(jī)實(shí)驗(yàn)材料2.5M氯化鈣溶液：36.75克氯化鈣，70毫升雙蒸H2O，通過0.22μm濾膜過濾，體積調(diào)制100毫升...

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細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒作用檢測法：時(shí)間分辯熒光分析法

時(shí)間分辯熒光分析法1）銪熒光檢測法標(biāo)記靶細(xì)胞1．EuCl3的制備：稱取58.08mgEu2O3，用少量1NHCl攪拌至溶解，再用1NNaOH調(diào)節(jié)pH至4.0。加雙蒸水配成33～100mmol/L的保存液，4℃保存?zhèn)溆谩?．用預(yù)冷的標(biāo)記液將靶細(xì)胞濃度調(diào)整到5×106/ml，加50μl10mg/ml硫酸葡聚糖，置冰浴中20分鐘，其間搖晃數(shù)次。3．加入30μl100mmol/LCaCl2溶液終止反應(yīng)5分鐘。4．用含2mmol/LCaCl2的RPMI-1640培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞5次。用含...

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NAG檢測法檢測細(xì)胞生長

1．按MTT檢測法培養(yǎng)細(xì)胞和用不同稀釋度的細(xì)胞因子處理細(xì)胞。2．吸去培養(yǎng)液，用PBS洗滌兩次（如為懸浮細(xì)胞，應(yīng)在吸去上清液前先離心）。3．每孔加60μlNAG染液，在37℃5％CO2的飽和水汽二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4小時(shí)。4．每孔加90μl終止液，混勻后置酶聯(lián)檢測儀上測定光密度（OD）值，檢測波長402nm。以O(shè)D值對樣品稀釋度作圖，比較標(biāo)準(zhǔn)曲線和待測樣品曲線即可求得待測樣品中細(xì)胞因子的含量。

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